昆虫环境耐受性测试是生物环境试验的核心内容之一，直接关联生态风险评估、农药安全性评价及特种昆虫培育等领域的决策科学性。明确测试标准与方法，能有效规避试验误差，确保数据的可比性与可靠性。本文围绕生物环境试验中昆虫环境耐受性测试的核心环节，系统梳理标准框架与具体操作要点。

昆虫环境耐受性测试的主要标准框架

当前，昆虫环境耐受性测试的标准体系以国际组织（ISO、OECD）与国内国标（GB）、行标（NY、SN）为核心。国际层面，ISO 11267《土壤质量——陆生无脊椎动物的急性毒性测试》明确了土壤昆虫对温度、湿度的关联要求；OECD系列标准更细分至具体类群——OECD 207适用于土壤栖居昆虫，OECD 218（蜜蜂急性接触毒性）、OECD 237（家蚕急性口服毒性）聚焦经济昆虫。

国内标准方面，GB/T 31270.1-2014规定了农药对土壤昆虫的温度-农药联合暴露要求；NY/T 2882.1-2016明确赤眼蜂繁育的温湿度控制标准（25±1℃、RH 70%-80%）；SN/T 2584-2010对检疫性昆虫（如美国白蛾）的低温耐受性（-15℃下24小时存活率）提出量化要求。

这些标准的共性要求包括：试验昆虫需同龄健康、环境参数波动≤±1℃（温度）/±5%RH（湿度）、至少3次重复等，为测试规范性提供基础框架。

试验前的昆虫与环境准备

试验昆虫需选“模式生物优先、代表性强”的物种：模式昆虫（家蚕、果蝇、赤拟谷盗）遗传清晰、易饲养，是通用测试首选；特定场景选代表性物种——农田生态选菜粉蝶、蚜虫，仓储环境选赤拟谷盗、玉米象。

昆虫种群需健康同龄：选用羽化后24小时内的成虫或2龄末期幼虫，雌雄比1:1（除非测试性别效应）。例如，蜜蜂测试需选3-5天工蜂，避免幼蜂/老蜂的生理差异。

环境预调试需匹配标准：温度用精密气候箱（波动≤±1℃），湿度用饱和盐溶液（如NaCl对应75%RH）维持，光照用LED光源模拟12L:12D光周期。预调试提前24小时完成，确保参数稳定。

设备试剂需合规：饲养容器用无毒透气塑料盒，试剂为分析纯（农药符合GB/T 1604-2001），重金属溶液用去离子水配制。

温度耐受性的测试方法与指标

温度测试分急性与慢性：急性用梯度温度箱（如5℃、10℃、25℃、35℃、40℃），每个温度点暴露2-4小时，观察48小时死亡率——热带昆虫（蟑螂）的高温LT50约42℃，温带昆虫（菜粉蝶）约38℃。

慢性暴露模拟渐变：每天调温1-2℃（如25℃升至35℃），持续1-2周，观察生长繁殖——家蚕在32℃下化蛹率从85%降至50%，产卵量减少30%；赤拟谷盗在15℃下发育历期从20天延长至45天。

指标含致死（死亡率）与亚致死（羽化率、繁殖力、发育历期）：赤拟谷盗慢性低温后的发育延长，直接影响仓储种群增长。

质量控制：对照组死亡率≤10%，否则试验无效；用Probit分析计算LT50。

湿度耐受性的测试方法与指标

湿度测试聚焦高湿（≥90%RH）与低湿（≤30%RH）：高湿用K2SO4饱和溶液（98%RH），观察霉变率——家蚕高湿下白僵菌感染率达80%；低湿用LiCl（11%RH），计算失水率——蚜虫低湿下失水率2%-3%/小时，48小时死亡；沙漠拟步甲仅0.5%/小时，存活7天以上。

指标含存活率、失水率（(初始体重-当天体重)/初始体重×100%）、水分含量（烘干法：(鲜重-干重)/鲜重×100%）——菜粉蝶幼虫水分降至65%时开始死亡，沙漠昆虫可降至50%。

注意温湿交互：35℃+95%RH加速水分流失与病菌繁殖，毒性强于单一因子。

10℃+20%RH减缓代谢，延长存活。测试时需固定温度（如25℃），或设多因子组合。

光照耐受性的测试方法与指标

光照测试分光周期与光强：光周期用不同时长（0L:24D、12L:12D、24L:0D），观察活动与繁殖——果蝇24D下交配率降50%，产卵量减40%；家蚕12L:12D化蛹率最高（85%），24L下降至60%。

光强固定光周期（12L:12D），调光强（50lux、500lux、1000lux）——蚜虫低光强（50lux）繁殖率高30%；蜜蜂高光强（1000lux）回巢率从90%降至60%。

指标含活动频率（红外传感器记录）、交配成功率、产卵数——小菜蛾16L:8D交配率90%，8L:16D仅60%。

注意光源发热：用LED灯，加隔热层避免温度干扰；选对应波长（蜜蜂用含紫外线灯，家蚕用蓝光灯）。

化学因子耐受性的标准测试方法

化学因子测试用标准化方法：

1、点滴法：接触性农药（如氯氰菊酯），滴1μL溶液在昆虫胸部，OECD 218（蜜蜂）指定方法，48小时死亡率——氯氰菊酯对蜜蜂LD50=0.1μg/虫。

2、饲喂法：内吸性农药（如敌敌畏），混入饲料饲喂1周，观察亚致死效应——家蚕饲料加0.01%敌敌畏，幼虫生长缓慢。

3、浸渍法：水生昆虫（蚊子幼虫），浸入0.5mg/L吡虫啉溶液，24小时死亡率——GB/T 27855-2011指定方法。

指标含LD50（μg/虫）、LC50（mg/L）、亚致死效应（蜜蜂导航能力）——亚致死剂量（0.01μg/虫）使蜜蜂回巢率降40%。

质量控制：对照组死亡率≤10%，重复间变异系数≤20%；用Probit分析计算LD50/LC50。

数据的记录与质量控制要点

记录需全面：记昆虫数量、环境参数、观察指标（产卵数、化蛹率），保留原始记录；每2小时记温度，每天补湿度溶液。

统计用专业方法：致死效应Probit回归，亚致死效应ANOVA+Tukey多重比较（P<0.05为显著）。

质量控制：对照组死亡率≤10%，重复变异≤20%；同一批次昆虫、同一实验室完成，避免批次差异。

遵循3R原则：减少昆虫数量（用最小样本量）、替代（细胞模型）、优化（自动计数减误差）。