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厌氧培养箱是生物环境试验中用于模拟厌氧环境的核心设备，其环境参数（如厌氧度、温度、湿度、气体浓度）的稳定性直接影响厌氧微生物的生长状态与试验结果准确性。因此，建立科学的环境参数测试流程及严格的要求，是确保试验可靠性的关键环节。本文围绕生物环境试验需求，详细阐述厌氧培养箱环境参数的测试流程与技术要求。
测试前的准备工作
首先进行设备状态检查：确认培养箱外观无变形、损坏，门密封胶条无老化、开裂或破损，箱体连接处（如侧板、顶板）无松动。接通电源后，启动设备检查控制系统（温度、湿度、气体流量显示）是否正常，空载试运行30分钟，观察有无异常噪音、振动或报警。
其次完成测试仪器校准：所有用于测试的仪器（如便携式氧分析仪、温湿度记录仪、红外气体浓度分析仪）需经具备CNAS/CMA资质的机构校准，校准日期在有效期内。测试前对氧分析仪用纯氮气（99.999%）调零，温湿度计用标准湿度发生器验证，确保仪器精度符合要求（如氧分析仪误差≤±0.05%）。
最后确认试验方案：根据试验标准（如GB/T 15481《检测和校准实验室能力的通用要求》）或微生物培养需求，明确测试参数（厌氧度、温度、湿度等）、测试点数量（5-9个）、位置（对角线布点）及判定标准（如厌氧度≤0.1%O₂、温度±0.5℃）。
厌氧度（氧浓度）测试流程及要求
测试点选择需覆盖箱体关键区域：采用对角线布点法，选取箱体四角（距内壁10cm）、中心及培养层上中下三层（若有多层），共5-9个测试点，标记位置确保一致性。
测试时机分空载与负载两种场景：空载测试需设备预热至设定温度（如37℃）并稳定运行1小时；负载测试需放入模拟样品（如与试验样品体积相同的无菌容器，负载率50%），稳定30分钟后测试，模拟实际试验的气体消耗与流动状态。
测试方法：将氧分析仪探头置于测试点中心，避免接触箱体壁或负载，等待读数稳定（约1-2分钟）后记录；每个点测试3次取平均值。要求氧浓度≤0.1%O₂（严格厌氧试验）或≤0.5%O₂（兼性厌氧试验），所有测试点偏差需≤±0.05%O₂。
温度参数测试流程及要求
温度传感器采用9点布点法：顶面2点（距顶面10cm）、底面2点（距底面10cm）、前后面板各2点（距面板10cm）、中心1点，传感器固定于支架避免接触加热元件。
测试时间：设备预热至设定温度后稳定30分钟，连续记录60分钟，每5分钟读取一次数据。计算温度均匀度（所有点最大值与最小值之差）≤±0.5℃，温度波动度（单一点最大值与最小值之差的平均值）≤±0.2℃。
若温度不均匀，需检查加热元件（如加热管是否损坏）、循环风扇（转速是否正常），调整风扇风速或加热元件位置后重新测试。
湿度参数测试流程及要求
湿度测试点与温度一致，传感器需远离加湿装置（如雾化器），避免直接接触水汽。设定湿度（如60%RH）后稳定运行2小时，关闭箱门避免外界干扰，连续记录30分钟数据。
要求湿度偏差（测试值与设定值之差）≤±5%RH，湿度均匀度（最大值与最小值之差）≤±3%RH。若湿度不足，检查加湿器水位（添加蒸馏水）或加湿管是否堵塞；若湿度过高，检查冷凝管是否正常或排水口是否畅通。
惰性气体浓度测试流程及要求
对于需混合气体（如N₂+CO₂）的培养箱，采用红外气体分析仪测试：探头分别置于气体入口（距入口10cm）、箱体中心及出口处，测试前用标准气体（如5%CO₂）校准仪器。
要求CO₂浓度符合试验设定（如5%±0.5%），N₂浓度≥94.5%；入口浓度略高于中心（气体扩散需要）。若浓度异常，检查气体钢瓶压力（≥1MPa）、流量控制器（设置是否准确）或混合装置（是否正常工作）。
密封性测试流程及要求
密封性是厌氧环境的基础，采用压力衰减法或皂泡法：压力衰减法向箱内充压至10kPa，30分钟后压力衰减率≤0.5kPa/h；皂泡法用肥皂水涂抹密封胶条、管路接口，无气泡产生。
若密封性不达标，更换老化的密封胶条、紧固箱体连接处或修复管路接口，重新测试至符合要求。
数据记录与追溯要求
测试记录需包含：日期、时间、培养箱编号、仪器编号及校准日期、测试点位置、参数值、测试人员签名。记录实时准确，不得涂改（划改需签名），保存期限≥试验完成后2年。
当试验结果异常时，通过记录追溯设备状态、仪器校准情况及测试人员，快速定位原因（如氧浓度超标可追溯至密封胶条老化）。
校准与验证要求
测试仪器每年校准一次，校准证书有效；培养箱每季度全面验证一次，维修或搬迁后重新验证。验证内容包括所有环境参数，由培训人员执行，报告留存归档。
异常处理流程
氧浓度超标：检查氮气流量（调整至5L/min）、密封件或氧催化器（失效需更换）；温度不均：检查加热管或风扇；湿度异常：调整加湿/除湿装置。处理后重新测试，确认参数符合要求后方可使用。
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